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液相色譜柱的異常情況及解決方法
  • 更新日期:2023-03-10      瀏覽次數(shù):989
    • 在液相色譜上遇到的問題有很多,例如HPLC 色譜柱的一些常見問題時有出現(xiàn),可能會令很多實驗員感到非常沮喪。那么今天,景源帶您了解這些是什么以及如何解決它們可以讓您避免數(shù)小時的挫敗感。

       

      一、無峰

             可能有多種因素會導(dǎo)致 HPLC 輸出中不出現(xiàn)峰或出現(xiàn)非常小的峰。正常讀數(shù)應(yīng)該又大又細的峰值,高度也是會有不一樣的。小峰或沒峰可能代表檢測器燈已關(guān)閉,沒有流動相流量和樣品丟失或變質(zhì),或者檢測器、積分器、進樣器閥或記錄器這些有問題存在。

           其實先要確保探測器是打開狀態(tài),然后檢查所有連接情況。確保自動進樣器樣品瓶中有足夠的液體和樣品中無氣泡情況出現(xiàn),并使用新的標(biāo)液重新進行系統(tǒng)的檢查。

       

      二、無流量

             如果沒有出峰,很有可能是HPLC 色譜柱中沒有流量;也可能意味著泵已關(guān)閉或流量因某種原因中斷或受阻;同時泵頭中也可能存在泄漏或空氣滯留。

             如果泵關(guān)閉,需要啟動泵并檢查儲液器中的流動相液位和整個系統(tǒng)的流量情況。檢查樣品環(huán)是否有其他障礙物或氣塞,并確保流動相組分可混溶且流動相是否能夠進行正常脫氣。繼續(xù)檢查系統(tǒng)松動情況,檢查泵是否有泄漏等其他問題。

      三、壓力問題

            要是壓力低于平常或無壓力這有可能是系統(tǒng)某處發(fā)生泄漏或空氣滯留;要是系統(tǒng)壓力過高,那么泵、進樣器、在線過濾器、保護柱、分析柱或管路都可能有問題。

            如果是檢查發(fā)現(xiàn)是低壓,那就要檢查整個色譜系統(tǒng)是否存在泄漏、泵密封件故障或閥門損壞的情況等。如果是高壓的話,先從移除保護柱和分析柱,并用接頭替換,將進樣器重新連接到檢測器。以 2-5 mL/min 的速度運行泵,并開始查找原因,。如果問題是出現(xiàn)在分析柱上,請在分析柱與檢測器斷開連接時反轉(zhuǎn),并沖洗色譜分析柱;在必要的時候更換入口濾芯或更換柱子。

       

      四、裂峰

             如果發(fā)現(xiàn)峰出現(xiàn)在中間下降形成M形,那么可能是分析柱入口可能存在一些污染;也可能在色譜柱入口處有篩板被堵塞了或存在了不均勻的空隙;還有可能是樣品溶劑與流動相不相容。

             如果是入口處有污染,請反轉(zhuǎn)并沖洗色譜柱,并在需要時更換篩板。還可以用具有相同鍵合相功能的薄膜顆粒重新填充色譜柱頂部,并繼續(xù)以反向流動方向使用色譜柱;如果是問題出在樣品上,請調(diào)整流動相中的樣品,因為樣品和流動相中的 pH 值差異會導(dǎo)致分峰。

       

      五、尾峰和前峰:

             發(fā)現(xiàn)峰不是直線上升和下降,而是開始在前面或后面就形成輕微的傾斜,則稱為前端或尾部。這通常可能是保護柱或分析柱受損或是色譜柱過載。如果有拖尾峰,請先移除保護柱并嘗試分析,必要時就需要更換。如果需要恢復(fù)或更換分析柱。一定要檢查流動相的組成和色譜柱的性能。有前峰的話,請嘗試注入更小的體積或稀釋樣品;如果溶劑有問題請調(diào)整溶劑,并使用 50 柱體積的 HPLC 級乙酸乙酯以標(biāo)準流速的兩倍或三倍沖洗極性鍵合相柱,然后在開始分析之前使用中等極性溶劑。

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